新型冠狀病毒肆虐，核酸檢測(cè)試劑盒的研制和廣泛使用，對(duì)于病例的確診起到了重要作用。不過(guò)有臨床醫(yī)生發(fā)現(xiàn)，試劑檢測(cè)會(huì)出現(xiàn)“假陰性”和“假陽(yáng)性”，如天津某新型冠狀病毒肺炎病例先后進(jìn)行了4次核酸檢測(cè)，前3次均為陰性，直到第4次檢測(cè)才呈陽(yáng)性。雖屬于小概率事件，但為什么會(huì)出現(xiàn)類似“漏檢”情況？

“漏檢”情況的出現(xiàn)可能由多種因素導(dǎo)致，中國(guó)計(jì)量院前沿中心主任、研究員戴新華告訴記者，“可能是樣本的收集、處理運(yùn)輸和保存不當(dāng)，也可能是新型冠狀病毒核酸檢測(cè)試劑盒質(zhì)量問(wèn)題，還有一種可能就是核心儀器的性能和運(yùn)轉(zhuǎn)狀態(tài)不佳”。

“假陰性”“假陽(yáng)性”從何而來(lái)？

2月5日，國(guó)家衛(wèi)健委發(fā)布《新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案（試行第五版）》，根據(jù)該方案，目前病例確診共有熒光定量RT-PCR檢測(cè)和基因測(cè)序兩種方法。其中實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)因其時(shí)間短、成本低等特點(diǎn)，已成為目前應(yīng)用最廣泛的新冠病毒確診的方法。

實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)病毒的原理，簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，就是將從病人呼吸道樣本或血液樣本中提取到的核酸和試劑配比好，隨后放到實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)分析儀（PCR儀）中，進(jìn)行PCR反應(yīng)，通過(guò)溫度的升降，病人樣本中的新冠病毒核酸會(huì)被特異性的引物探針識(shí)別，從而進(jìn)行快速?gòu)?fù)制，使其熒光信號(hào)倍增，儀器檢測(cè)到熒光信號(hào)的變化，并以擴(kuò)增曲線形式呈現(xiàn)，以此來(lái)最終確診病人樣本中是否含有新冠病毒。

“病例確診，除了試劑盒，還離不開(kāi)檢測(cè)設(shè)備，”戴新華說(shuō)，“參數(shù)準(zhǔn)確性能可靠的PCR儀，加上質(zhì)量可靠的核酸檢測(cè)試劑盒，兩者相互配合才能確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性?！比绻糜诓《竞怂釞z測(cè)的核心儀器PCR儀存在問(wèn)題，如溫度控制不準(zhǔn)確、溫度均勻性差別太大、熒光光路系統(tǒng)異常、熒光染料污染等情況，就會(huì)出現(xiàn)“假陰性”或“假陽(yáng)性”結(jié)果，從而導(dǎo)致“漏檢”。

病毒檢測(cè)的關(guān)鍵設(shè)備

作為病毒檢測(cè)的核心關(guān)鍵設(shè)備，PCR儀的工作狀態(tài)如何，將直接影響病毒檢測(cè)的效率和準(zhǔn)確度, 因此，對(duì)PCR儀的校準(zhǔn)尤為重要。為此，早在2015年，由中國(guó)計(jì)量院主導(dǎo)完成的《JJF1527-2015聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）分析儀校準(zhǔn)規(guī)范》就已發(fā)布實(shí)施。該規(guī)范第一起草人、中國(guó)計(jì)量院前沿中心副研究員高運(yùn)華介紹說(shuō)，該規(guī)范在國(guó)家層面上規(guī)定了PCR儀計(jì)量校準(zhǔn)的技術(shù)流程和性能指標(biāo)，計(jì)量性能指標(biāo)包括：溫度示值誤差、溫度均勻度、平均升溫速率、平均降溫速率、樣本示值誤差、樣本線性等6個(gè)指標(biāo)。

在該規(guī)范和中國(guó)計(jì)量院相關(guān)專家指導(dǎo)下，上海、浙江、江蘇、遼寧、云南、四川、河北等近10個(gè)省市的計(jì)量技術(shù)機(jī)構(gòu)先后建立了計(jì)量標(biāo)準(zhǔn)，開(kāi)展相關(guān)PCR儀的校準(zhǔn)工作。與此同時(shí)，中國(guó)計(jì)量院建立了相對(duì)完善的PCR儀校準(zhǔn)能力，配備了各種類型的標(biāo)準(zhǔn)器，適用于16孔、24孔、32孔、48孔、96孔、384孔等不同控溫模塊PCR儀的性能校準(zhǔn)，還研制了定量PCR儀校準(zhǔn)用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

確保檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠

此次疫情爆發(fā)后，全國(guó)各地醫(yī)療機(jī)構(gòu)PCR儀檢測(cè)需求激增，各地計(jì)量技術(shù)機(jī)構(gòu)夜以繼日地為所在省市的疾病預(yù)防控制中心、定點(diǎn)醫(yī)院的PCR儀進(jìn)行計(jì)量校準(zhǔn)服務(wù)，保障新型冠狀病毒檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。而在他們工作的背后，中國(guó)計(jì)量院為其提供量值溯源、咨詢和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)等支撐服務(wù)。截至2月5日，已累計(jì)為南京市計(jì)量院等全國(guó)各級(jí)計(jì)量技術(shù)機(jī)構(gòu)提供了44套PCR儀器校準(zhǔn)用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)服務(wù)，有效保障了地方計(jì)量技術(shù)機(jī)構(gòu)PCR儀校準(zhǔn)結(jié)果的溯源性和可靠性。

由于全國(guó)已實(shí)現(xiàn)建標(biāo)、能夠完成熒光定量PCR儀校準(zhǔn)的計(jì)量機(jī)構(gòu)數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足校準(zhǔn)需求,因此,除了支撐保障地方計(jì)量技術(shù)機(jī)構(gòu)外，中國(guó)計(jì)量院前沿中心生命科學(xué)計(jì)量團(tuán)隊(duì)還直接奔赴各大醫(yī)院、疾控中心、核酸檢測(cè)試劑盒生產(chǎn)廠家，為其開(kāi)展PCR儀的計(jì)量校準(zhǔn)服務(wù)。疫情爆發(fā)以來(lái),已為解放軍總醫(yī)院、軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院、中國(guó)疾病預(yù)防控制中心病毒所、阜外醫(yī)院、中山大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院、廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院等醫(yī)療機(jī)構(gòu)的多臺(tái)PCR儀進(jìn)行計(jì)量校準(zhǔn)服務(wù)?！拔覀兊墓ぷ骶褪且_保用于新型冠狀病毒核酸檢測(cè)的PCR儀工作狀態(tài)良好，出具的數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠。”高運(yùn)華說(shuō)。